Extracción de DNA
Se plantearon diferentes métodos para la extracción, y se opto por el micrométodo de Murray y Thomson (1980) con ciertas modificaciones.
El desarrollo de métodos físicos y químicos de extracción, purificación y análisis de los componentes moleculares (que conforman los diferentes compartimentos celulares), cada vez más específicos y eficientes, ha sido decisivo para aumentar el entendimiento de los mecanismos moleculares implicados en la transmisión, transducción y transmisión de la información genética. En este proceso de desarrollo se ha dado origen incluso, a métodos y técnicas propios de la Biología Molecular, entre los que destacan los diseñados para la extracción y purificación de los ácidos nucleicos (DNA y RNA), así como de las proteínas.
Uno de los grandes propósitos de nuestra práctica es conocer este micrométodo de extracción de DNA, en diferentes tipos de tejidos: insecto, planta u hongo. Se presenta una identificación de condiciones óptimas para cada etapa del protocolo que es la colecta, la homogenización y lisis, la precipitación y purificación, para establecer los criterios de valoración en el rendimiento de este método.
Para iniciar la extracción de los ácidos nucleicos, es necesario obtener la muestra biológica (tejido); insecto, planta u hongo. Esto se logra con la lisis tisular. Aquí un video del proceso.
Una vez en laboratorio iniciamos con la extracción de proteína del DNA, en primera instancia es necesario agregar el buffer de extracción y homogenizar la mezcla utilizando el vortex, e incubar a baño María, centrifugar. Posteriormente transferir sobranadante, sí lo que parece jugo, nada de tejido, para agregar cloroformo: alcohol isoamílico. Nuevamente utilizar el vortex y meter a centrifigurar.
Finalizamos la primera parte de nuestra práctica con la precipitación del DNA. Transferir sobrenadante y adicionar isopropanol y dejar incubar a -20°C hasta la siguiente práctica.
